細(xì)胞侵襲實驗目的：研究趨化因子或其他營養(yǎng)物質(zhì)對細(xì)胞侵襲的影響。

一、準(zhǔn)備實驗以及包被

　　從冰箱中取出Assembling tool 以及 CIM plate 上板。拆開上板，可見板上和蓋子上均有藍(lán)點標(biāo)記，把板放在 Assembling tool 上。

　　1、首先進(jìn)行 Matrigel 包被，每孔內(nèi)加入 50 µl matrigel ，每做完一個梯度，即 4 個孔后， 馬上從孔內(nèi)輕輕吸出 30µl Matrigel。

　　2、空白對照的四個孔同樣加入 50µl 的無血清培養(yǎng)基，然后吸出 30µl。

　　3、蓋上蓋子，將整個 Assambling tool 連同板子 ，放入培養(yǎng)箱中孵育 4-5 小時，使 Matrigel凝結(jié)。

二、組裝 RTCA CIM Plate-16 以及測量 CI 背景值

　　1、取出CIM plate 下板，放在 Assambling tool 第二個槽內(nèi)，下板中加入160µl 預(yù)溫好的完全培養(yǎng)基。將 CIM-Plate 16 Assembly Tool 旋轉(zhuǎn) 90 度，將上板拿起，水平移到下板上方，檢查安裝是否緊扣在一起。

　　2、在上板中每孔加入 30 µl 無血清培養(yǎng)基，蓋上上板蓋子將整塊 CIM-Plate 16 放入 RTCA DP 分析儀。放在培養(yǎng)箱中平衡一個小時。

　　3、一小時后，進(jìn)入 schedule 頁面，點擊開始按鈕。背景值測完后，顯示 ready for starting next step.回到Message 頁面，看是否有任何報錯信息。

三、準(zhǔn)備細(xì)胞，并加入 RTCA CIM Plate-16 上腔

　　1、取出CIM plate，重新放回到超凈臺中的 Assambling tool 上，每孔加入 100 微升含 20000 個細(xì)胞的細(xì)胞懸液。

　　2、為了避免培養(yǎng)箱內(nèi)由于溫差產(chǎn)生蒸騰作用而引起邊緣效應(yīng)，將 CIM 培養(yǎng)板，在常溫下靜置半個小時。
四、運行實驗

　　將 CIM plate 重新放回RTCA DP 分析儀上，看到提示 plate scanned, connection is OK 后，點擊開始第二步。這時機器開始每 15 分鐘檢測一次孔內(nèi)細(xì)胞的遷移的情況。

五、實驗結(jié)果分析

　　在 Cell Plot 頁面，選擇顯示平均值以及標(biāo)準(zhǔn)差，點擊 add ,可見不同組得到的實驗信號。當(dāng) Matrigel 濃度較大時，細(xì)胞侵襲越困難，而無血清培養(yǎng)基對照孔內(nèi)，細(xì)胞侵襲的信號就非常明顯。根據(jù)包被 Matrigel 的濃度由高到低，細(xì)胞侵襲能力逐漸增強。